Questões de Biotecnologia e engenharia genética da ONC

A PCR copia milhões de vezes um trecho escolhido de DNA, usando primers (iniciadores) específicos para aquele trecho. No teste de HPV, os primers reconhecem o DNA do vírus em células colhidas do colo do útero. Mesmo pouquíssimo DNA viral vira uma quantidade detectável: daí a alta sensibilidade, que encontra o vírus antes de aparecerem lesões visíveis no Papanicolau.

As outras falham: a PCR detecta DNA, não proteínas no sangue; ela funciona justamente nas fases iniciais; detecta o genoma viral dentro das células, não precisa do vírus completo; ela não avalia diretamente alterações nas proteínas das células, e por isso não substitui por completo a citologia.

Resposta: E

Dica: PCR = amplificar DNA. Sempre que a questão falar em detectar pouco material genético, pense em PCR.

A figura mostra um caminho que acontece todo no computador: o programa recebe a sequência de letras do gene (CTTGAGCCCC...) e devolve um modelo 3D da proteína. Nenhuma célula, núcleo ou proteína real participa.

Para ir do DNA à proteína, o algoritmo precisa refazer, por simulação, o que a célula faz:

• transcrição: DNA → RNA mensageiro;
• tradução: RNA (lido de três em três bases, os códons) → sequência de aminoácidos;
• só então a sequência de aminoácidos é usada para prever o dobramento 3D.

Fazer isso por computador é trabalhar in silico.

As outras alternativas falham:

• A IA não sintetiza proteína real; ela só calcula um modelo.
• Ela não lê o DNA dentro do núcleo: lê um arquivo com a sequência.
• Ela não altera o DNA de ninguém.
• Sem converter o DNA em aminoácidos, não há como prever a forma, porque é a sequência de aminoácidos que define o dobramento.

Resposta: C

Dica: in vivo = no organismo; in vitro = no tubo de ensaio; in silico = no computador.

Para inserir o gene no plasmídeo, a enzima escolhida precisa:

1. cortar dos dois lados do gene, sem cortar o gene;
2. cortar o plasmídeo num ponto que não destrua o gene de resistência a antibiótico (RA), usado para selecionar as células que receberam o plasmídeo.

Na figura:

• Hind III corta dentro do gene: descartada.
• Eco RI só tem sítio de um lado do gene e, no plasmídeo, corta dentro do RA: descartada.
• Bam HI tem sítios antes e depois do gene e corta o plasmídeo uma vez, fora do RA: é a enzima certa.

Os plasmídeos são moléculas de DNA circular encontradas naturalmente em bactérias.

Resposta: B

Dica: use a mesma enzima no gene e no vetor (pontas coesivas compatíveis) e nunca uma que corte o gene de interesse ou o marcador de seleção.

Na figura, a fita de cima, de 5' para 3', é: TTAAGGAATTCAA. A sequência reconhecida pela EcoRI é GAATTC, que aparece uma vez. Na fita de baixo, lida de 5' para 3' (da direita para a esquerda), também aparece GAATTC no mesmo lugar: a sequência é um palíndromo.

1. Quantos fragmentos? A enzima corta as duas fitas num único sítio. Uma molécula de DNA de fita dupla cortada em um ponto vira dois fragmentos de fita dupla.

2. Que tipo de ponta? A EcoRI corta entre G e A em cada fita: G^AATTC. Como os cortes nas duas fitas ficam deslocados, sobra em cada fragmento uma pontinha de fita simples (AATT). Essas pontas são coesivas (adesivas), porque podem se parear de novo com pontas complementares.

Extremidades cegas só aparecem quando o corte é no mesmo ponto das duas fitas. E a enzima não separa as fitas, então não se formam fragmentos de fita simples.

Resposta: C

Dica: enzima de restrição que corta deslocado gera pontas coesivas, muito úteis para "colar" o DNA em plasmídeos com a DNA ligase.

Carga do DNA: cada nucleotídeo tem um grupo fosfato, com carga negativa. Por isso o DNA é negativo e, no campo elétrico, anda para o polo positivo (ânodo). A amostra é colocada no lado do polo negativo (cátodo), para atravessar o gel.

Tamanho: o gel funciona como uma malha. Fragmentos menores passam pelos poros com mais facilidade e andam mais. A alternativa justifica isso com a 2ª lei de Newton (mesma força, menor massa, maior aceleração), uma simplificação aceita pela banca.

• A: a carga negativa vem do fosfato, não da pentose (açúcar); e as fitas maiores andam menos.
• C: a carga do DNA é negativa, não positiva.
• D: se fosse pipetado no ânodo, o DNA negativo já estaria no polo que o atrai e não correria pelo gel.

Resposta: B.

Dica: na eletroforese, o DNA "corre para o vermelho" (polo positivo), e os fragmentos menores vão mais longe.